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巴斯德毕赤酵母表达系统及其分泌型蛋白表达的研究进展


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第3 卷

第1 期 

稿床和 实验 医学杂 志  
J u n lo   iia  n   x e i n a  e ii e o r a  fCl c l d E p rme tlM d cn   n a

Vo . No.  13, 1
M a .2 O   r ,O 4

2O 04年 3 月  
神  

妻 献 述耄 文综  
五*五 五 鲍 钝五9五 e 

文章编号 :17—49 20 )0 —04 —0  61 65(04 1 03 5 '

巴斯 德 毕 赤 酵 母 表 达 系统 及 其 分 泌型  蛋 白表 达 的研 究 进 展 
路 蓉 综述 安 云庆 审校 

( 首都 医科 大学免 疫学 系,北京  105 ) 004 
【 要】 巴 摘   斯德毕赤酵母表达系统可使用强效的醇氧化酶 I(O 1 A X )启动子, 在甲醇诱导下实现外源基因的 
高效表达。外源基 因整合入酵母的染色体基因组后 ,通过营养缺陷型基因或抗性基因进行阳性转化子的筛选。将外源 

基因阅读框架与信号肽相融合 即可得到被修饰的分泌型外源目的蛋 白。现已有多种方法可进一步提高外源目的蛋白的 
表 达量 。  

【 关键词】 巴   斯德毕赤酵母 (i lp ti ;甲醇;醇氧化酶 (O ) P h   sr) c a aos A X 

在过去的 2 中 ,甲基营养 型 巴斯德 毕赤酵母  0年
( i i ps r )已发 展成 为能够生成 多种外源蛋 白的  P h  at i c a os 卓越表达 系统 。随着 菌株 和载体 的改 良以及操作技术 

AX O 2基 因编码 醇氧化 酶 ,但 细胞 中醇 氧化 酶活性 以  A X 基 因编码的产物 为 主。 甲醇可严 格调 控和诱 导  O1

A X 基 因 的表 达 ,以 甲醇 为碳源 进 行摇 瓶 培 养 时 , O1   A X 基 因编码的醇氧 化酶可达 细胞 可溶性 蛋 白总量  OI 的 5 ,用发 酵系统培养时可达 到或超过 细胞可 溶性  %
蛋 白总量 的 3 %。A X 基 因表达水平 的调控发 生在  0 O1 转 录水平 ,以甲醇为碳 源生 长 的细胞 能检 测到 A X   O 1

上 的显著进步 ,此 系统 已成为实验室研 究及商业生产  重组蛋 白 的新 宠 。本 文 对 巴斯德 毕 赤 表 达 系 统 的优 
势 、原理及应用进展进行 综述 。  
1 表达载体 的构建 

基 因的转 录 ( 占总 m N 的 5 ;而在其 它 碳源 中  RA %) 生长 的细胞 则检测不到 A X 转 录的信息 ,据 此可用  O1
甲醇诱导 巴斯 德毕 赤 酵母 表 达外 源 目的蛋 白。A X   O 1

所有 的表达载 体均包 含 以下基本 组件 :①在大肠  杆菌 中进行 自主 复制 的起 始位 点 ;②在 大肠 杆菌 和/   或毕赤酵母 中具有功 能的选择标记 ;③ 表达元件 :来 
源于醇氧 化酶 1( O 1 A X )基 因 5 ’端 启 动 子 序列 的  09k . b片段和来源 于 A X 基 因转 录终止 序列 的 0 3   O 1 .  

基 因存在抑 制/ 抑制 和诱 导两种 调控 机制 :培 养物  去 中抑制物 ( 如葡萄糖 )去除后 ,并不 能使 A X 基 因  O1 大量转 录 ,只有在 甲醇诱 导下 ,A X 基 因才能 大量  O1
转 录。  

l 片段 ;④ 多 克隆 位点 :一 般 而言 ,外 源基 因编 码  d ) 序列第一个腺 嘌呤 一胸 腺 嘧啶核 苷 一鸟 嘌呤 (   ) A   与 A X 基因 A G之 间 的距 离 达到 最 小 时 ,表达 效  O1 T

虽然 利用 A X O 1基 因 已成 功 表 达 了多 种 外 源 蛋  白 ,但此 基因表达系统不适 用于食 品生产 ;此外 ,发 

果最佳 ,此插入位置与大多数多克隆位点的第一个酶  切位点相符… ;⑤信号肽 序列 :将其与外 源基因融合 
克隆到表达载体阅读框架 内 ,以分 泌形式 表达 目的蛋  白。常见 的表达载体及其选 择标记 见表 1 】 {。 2 
11 启动子  .

酵培养时由于添加大量 甲醇还存在火灾隐患。因此 ,   不 以甲醇 为唯一诱 导物 的启动子具有更 大吸引力 , 目  
前 已研 制 成 功 的 主 要 包 括 :G P L I D( A ,FD ,P 8和  Y T 启 动子 。研 究 证 实 :① 巴斯 德 毕赤 酵母 3 PI 一磷 
酸 甘 油 醛 脱 氢 酶 基 因 (l e l hd 一3一popa   g cr d ye y ae hsht e dhd  ̄ ns,G J eyr a t e A )的启 动子 ( G P启 动 子 )在  P 即 A

巴斯德毕赤酵母表达 系统最常用 的启 动子是来 源  于 巴斯德 毕 赤酵母 醇 氧 化 酶 (l hl x ae 0   aoo oi s,A x) c   d 基 因 的启 动 子 。 巴斯 德 毕 赤 酵 母 可 利 用 A X O I和 

葡萄糖的诱导下 ,能提供与 A X 启动子水平相当的  O1
连续性表达 ,在培养过 程 中不需更换碳 源 ,操 作更 为 


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临床和实验 医学杂 志  
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M a ,O 4 r.2 O  

简便 。但 G P启 动 子 的连续 性 表达不 适 用 于对 酵母  A 具有 毒 性 作 用 蛋 白 的 生 产 。甘 油 或 甲 醇 也 可 激 发  G P启 动子 ,但 G P产量 分 别是 葡 萄糖诱 导 条件下  A A 的 23和 13 / /。② 巴斯德毕赤 酵母谷 胱甘肽依 赖性 甲  
醛 脱 氢 酶 (lthoe—dpn et o a eyedh— g ai ut n eedn f m l hd  e    r d

载体更易于筛选 ,可简化操作程序。近来 ,还成 功获  得一 系列新 的营养筛选标记 ,如 巴斯 德毕赤酵母氨基 

咪 唑 琥 珀 酸 草 酰 二 胺 合 成 酶 (mdii zl  a i md o — o a e
sci croa i   nh —s,A E 的基 因 ( D 1  uc oa xmd s t n b ey a e D ) A E)

和乳 清 酸 核 苷 一5 一磷 酸 脱 羧 酶 (min  ’ 一 ’ o ti 5   de
popa  ea oy s,U A hsht dcr xl e R )的基 因 (瓜A ) e b a I 3 o具 有 

yr eae L )基 因的启 动 子 ( FD 启 动 子 ) d gns,F D o 即 L1 ,   在甲基化胺 为氮 源 ( 葡萄糖为碳 源)培养条件下 ,能  够提供 与 A X 启 动子水平相 当的表 达 。在 甲醇为碳  O1 源 ( 酸铵 为氮 源 )的培 养 条件下 ,也 可诱 导 FD  硫 L1 启 动子表 达 目的蛋 白。③研究发 现 ,某 些外源基 因可  因被启 动 的表达 水 平 过 高 ,而 导 致 目的蛋 白折 叠失  准 ,加工 无 能 或定 位 错 误  。上 述 A X J O 1、G P或  A FD 启动 子 即为 导 致 外 源基 因过 高 表 达 的启 动 子。 L1   为扩大外 源基因的有效表达 ,某 些能够启动基 因柔和 
表达 的启 动子如 P X E 8和 Y T P 1启动 子 ,已从 巴斯德  毕赤 酵母 中分离 获得 。  
表 1 常见的 表达 载体及 其选 择标记 

上述 选 择 标 记 的 各 种 表 达 载 体 和 各 种 营 养 缺 陷 型  (dl r ,h4 r )毕 赤 酵母 菌 株业 已构 建 成  ae,a 4 i ,ua g s 3 功。  
13 表 达载体的转化  .

携 带完整组件 的表达 载体 首先 以质粒 的形式转 化  大肠杆 菌并在其 内进行扩增 ,经酶切和测序证 明表达  载体构建 正确后 ,转入 巴斯德毕赤酵母 中进行表达 。  
2 巴斯 德毕赤酵母菌株 

所有 的 巴 斯 德 毕 赤 表 达 菌 株 都 来 源 于 N R   RL
( ohr ei a R s rh ao t i ) 一Y 13 。绝  N r e R g n  e ac  bmo e tn ol e L rs 140

大部分 菌株具 有一个至多个营养缺陷型突变或抗性选  择标记 以供转 化后进行筛选 。  
2 1 巴斯德毕赤酵母 的表型  .

根据利 用 甲醇 的能力 ,可将 巴斯德毕赤酵母分成  三型 :第一 型 :即 M t ,此 型毕赤 酵母具 有完 整  u  型 的 A X 和 A X 因 ,能够在 甲醇中以野生型速率  O1 O 2基
生长 ,为甲醇快 利用型 ,绝大 多数 毕赤 酵母 为 M t u   表型 。第二 型 :即 M t ,此型 毕赤酵母 ,如 K 7  u型 。 M1 (i  喈4 ol 。 A G ) 的 A X 基 因部 分 敲 除 , hs a   x △. R 4 4 a  s O 1  

被酿酒酵母 A C 基 因所 取代 ,菌细 胞可依 赖 A X   RA O2 基因编码 的少量 醇氧化 酶完成 甲醇代谢 ,因此在 甲醇  培养 基 中生 长 缓 慢 ,为 甲醇慢 利 用 型 ;第 三 型 :即 
注 :HS :组 胺 酸 脱 氢 酶 基 因 ;Kn:卡 那 霉 素 族 抗 性 基 因; I 4 a    b  l :博来霉 素族抗 性基 因 。 e  

M t ,如 M 10—3( i   u型 - C0 h4 s

a l " S RA  x  o  ̄. A C a 2 x . 。 o

△’P i ) . h 4 ,此型毕赤 酵母 A X 及 A X ’ s O1 O 2基 因均被 
敲除 ,菌 细 胞 不能 进 行 甲醇 代 谢 ,无 法 在 甲醇 中生 

12 选择标记  .

长 ,为 甲醇不 利用型 J 。此外 ,研究 发现 ,当 A X  O1 和/ A X 基 因敲除后 ,A X 启 动子也 可通过 直接  或 O2 O1 与外 源 目的基 因融合 的方式产生外源 目的蛋 白,有 时  其表 达量 甚至高于 M t型  。 u   】  
22 蛋 白酶缺陷型毕赤 酵母  .

巴斯德毕赤酵母表达 系统 中的选择标 记包括 :①  营养缺陷 型选 择标 记 ,如 来 源于 巴斯 德 毕赤 酵 母 的 
HS 基 因和来 源于酿酒酵母 的 A G I4 R 4基因和 S C 基  U2 因 ;②抗性选择标 记 ,如来源 于大肠 杆菌 T9 3的能  n0

够使 真核细胞对卡那 霉素 家族 成员 C 8产 生抗性 的  A1 kn 因 ,和来 源于 印 度斯坦 链 异壁 菌 (tp ao . a  基 Sr t lt  e o le i u i ut u)的能够使 细 菌和 真核细 胞对 博莱霉  c s n sns h hd a 素家 族成 员 Zoi ec n产生 抗 性 的 s I基 因 ,该 基 因  hbe   (7 p 35b)能够 作 为细 菌 和酵母 菌 的选 择标 记 ,因此  含有此种选择标 记的表 达载体 (P Z系列 )较其他  pI C
— —

研究 发现 ,蛋 白酶缺 陷型毕赤酵母 ,如 S D 13 M 16 
(i  e4 pb ) M 16 ( i  r1 h 4 pp  r1 、S D 15 h 4 pb )和 S D 18 s s M l6 

(i e4 hs pp)可有效 降低 外 源 目的蛋 白 的酶解[J 因  4 3 。 此在大规模发 酵培养时 ,使用此类蛋 白酶缺 陷型菌株  有利于获得功 能性 外源 目的蛋 白。但是此类蛋 白酶缺 

陷型菌株的活力较差 ,转化率低且生长缓慢 ,所获外 

4 4 ——  

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源 目的蛋 白产 量较低 。因此 ,只有在其他降低蛋 白酶  解方法均不理 想时 ,才使用 蛋 白酶缺陷型菌株 。  
3 表达载体 的整合 

对相应酶切位点的保护作用 ,而降低对前导肽序列的  酶切效率。有时,采用上述信号肽序列均不能引导外 
源蛋 白分泌性表达 。为此 ,M rnz u 等人将 a   ai —R i te z 一 交配因子 前 导肽 序 列进 行 突变 , 以产生 更 为 有效 的 

巴斯德毕 赤酵母细胞不含 天然质粒 ,表达载体多  以整合 方式 进入 巴斯德毕 赤酵 母染色体基 因组 中。整  合有如 下 两 种 方 式 :① 在 选 择 标 记 基 因如 HS I 4或  A X 启动子 处酶切表 达载 体使 之线性 化后 ,将 其转  O1 入适 当的营养 缺陷型毕赤酵母 菌 内 ,经过 同源重组 以 
单交换 (i l c s—oe)的方式插入毕赤 酵母 菌基  s g  m s vr ne 因组 中。此 种 整 合 的成 功 率 为 5 % ~8 % ,转化 子  0 0

Kx e2内肽酶酶切位点。此外,还使用完全人工合成  的 p p 前导肽序列提高了人胰岛素蛋白的产量L 。 rr eo 7  J
42 外 源蛋 白的糖基化作用  . 巴斯德毕 赤酵母对 分泌的外 源蛋 白具有糖基化作  用 ,可通过 N一 连接使寡糖链与外 源蛋 白肽链糖基 化  识别 位点 ( s An—X—Sr r e   )天冬 酰 胺 上 的氮 原 子  ( )共价 结合 ;也 可通 过 O一连 接使 寡 糖链 与外 源  N

的 M t 型 与原 宿 主菌 相 同 。② 载 体 经酶 切 后 ,使  u表 其外源基 因表达 元件和标记 基因的两端与酵母染色体  A X 基因 3 O1 ’和 5 ’端 发 生 双 交 换 (ob  r s   dul c s — e o oe vr 整 合 I 整合 率 为 1 % ~2 %) )性 t ]( 0 0 ,即使 酵 母 

蛋白肽链丝氨酸/ 苏氨酸上的羟基 ( H)共价结合。 O  
高等真核细胞在其分 泌的外源蛋 白上所添加 的寡糖链  含 N一乙酰半乳糖胺 、半乳糖和 唾液 酸 ;而低等真 核  细胞如 巴斯德毕赤 酵母 在其 分泌的外源蛋 白上所 添加  的寡糖链 只含甘 露糖 。值得注意的是 :有些 天然 分泌  时不被糖基化 的蛋 白,由巴斯德 毕赤酵母表达 时却 可  能发生糖基化 。如人体 内合 成 的胰 岛素 样 生长 因子 I   为非糖基化蛋 白,而 由巴斯德 毕赤酵母表达 时 ,却 有  1% 发生 了糖基 化 作用 J 5 。此外 ,巴斯 德毕 赤 酵母 
为其外源蛋 白添加寡糖链 时 ,所 选择 的丝 氨酸和苏 氨  酸有时也与天然宿 主细胞不一致 。  

染色体 A X 基因被载体外源基因表达元件和标记基  O1 因所代替 。因此 ,酵母 只能依 赖 A X O 2基因编码的活  性较 低 的 醇 氧 化 酶 进 行 甲醇 代 谢 ,此 种 转 化 子 为 
M t 表型 o u s  

4 分泌型 外源蛋 白的修 饰 

4 1 信号肽及其选择  .
研究证实 ,巴斯德毕赤酵母 表达系统能 以胞 内和 

分泌方式表达外 源基因编码 的蛋 白。同时发现 ,以分 
泌方 式 表 达 的 外 源 蛋 白可 占培 养 物 上 清 总 蛋 白 的 
8 %  】 0


巴斯德毕赤酵母对外 源 目的蛋 白的糖基化作用具  有 以下两个主要特征 :①极少 出现 过度糖基化 ,可避  免外 源蛋 白产生过强 的免疫原性或 因糖链过长干扰外  源蛋 白正确折叠而影 响其功 能。②糖链 中不含具有潜 

这将 有利于 目的蛋 白的进一步纯化 。可供 毕 

赤酵母 选择 的信号 肽分为两类 :即外 源蛋 白自身的信  号肽和来源于酵母 的信号肽 。实验 证实 ,虽然外源蛋  白自身的信号肽能够介 导 目的蛋 白的分 泌表达 ,但 有 
时也会 出现 目的蛋 白胞内堆积 ,不 能有效分 泌表达 的 

在致敏作用的 a ,3 一1 一甘露糖【】 8,使用安全。  
5 提高蛋 白表达量 的策略 

51 筛选 高拷 贝转化菌株  . 优化蛋 白表 达 的 常用 方 法是 获 得 高 拷 贝转 化 菌  株 。实验表 明整合 高拷贝外源基 因的转 化菌株 ,其外  源蛋 白的表 达量高于单拷贝转化菌株 。获得含高拷贝  外源基 因的巴斯 德毕赤酵母转 化菌株 的方法 如下 :①  构建含高拷 贝外 源基因的表达载体 ,此种表 达载体构  建方法如下 :用 Bm I gI a H —Bl I或 Sl一)l 双酶 切  a  I I 0 外 源 目的基 因 ,然 后利 用 B m I a i 或 SI 与  aH 与 gⅡ a I
X o 酶切位 点 的交叉 结合 性 ,将 酶切 产 物插 入 到用  hI Bm I Sl酶切 的含有单拷 贝外 源 目的基 因的表达  aH 或 a I

现象 。因此 当用 毕 赤 酵母 细胞 表 达 分 泌 型外 源 蛋 白   时 ,通 常选 用来源 于酵母 的信号肽 【 。 6  ] 目前可 供选择 的酵母 信号肽 有 a 一交配 因子 的前  导肽序列 、酸性磷酸 酶信号 肽和蔗糖酶信号肽等 。其  中酿酒酵 母 a 一交配 因子前 导 肽 序列 的使 用最 为 广  泛 。但下列几 种因素可影 响此 种前导肽序列 的酶切效  率 :①受外源 目的蛋 白前导肽序 列邻近氨基酸种类 的  影响 :如前导肽 序列邻近 的氨基 酸为脯氨 酸时 ,K)  e2 【 内肽酶的切 除 效 率会 明显 下 降 ;② 受 全 前 导肽 序 列  (r+ r pe po )或 p f e序列选 用情况 的影 响 :根 据分 泌型 
蛋 白种类 的不 同,有 时单 独使 用前 导肽 序列 中的 pe r  

载 体上。重复 以上方法 即可获得含 高拷 贝外源基 因的  表达载体 。②构建 含 HS I 4和 kr 基 因 的表达 载体 : ar t  

序列 ,有时 则使 用全 前 导肽 序列 (r +p )会 获 得  pe r o 较高 的酶切效率 ;③外源蛋 白形成 的三级结 构可通 过 

转化菌株对抗 G 1 48的能力与表达载体拷贝数密切相 
关 ,提高抗生素 G 1 48的浓度 可 以得 到含 高拷贝表 达 


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第3 卷 第1 期  20 04耳 3月  

临床和 实验 医学毒志  
J u n l fCii l n   x e i na M e iie o r a  o l c   dE pr n aa me tl dcn  

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载体 的转 化 菌 株 。巴斯 德毕 赤 酵母 被 转化 为 Hs + i   4 菌株后 ,再进行 高浓度 抗生 素 G 1 选 ,获得 的转  48筛 化菌株所 含表达载 体 的拷 贝数 可高 达 3 。③ 构建  0个 含 S i基 因的表达载体 :经此种表达载体转化 的宿  hb t 主菌 ,可直接用抗 生素 zoi 行筛 选 ,提 高 z e   ec n进 eL on 浓度可筛 选出含高拷 贝表 达载体 的转化菌株 。  
52 发酵 系统培 养  . 发酵系统培 养具有 以下主要优势 :① 巴斯德毕赤 

表 2 ,其中很多产物已应用于临床实验(一 )   驯。但毕  。 赤酵母的更广泛应用 ,还有待于对此体系进一步的研 
究 和开发 。  
裹 2 O3年报 道 的应用 巴斯 德毕赤 酵母 表达 的蛋 白  2O  

酵母 在发 酵系统 中可高密度 生长 (0 D60   )  50O  0u 。 在大量发酵培养条件下 ,培养物 中毕赤酵母 的细胞浓  度与其分泌 的 目的蛋 白的产量成正 比。②发酵系统可  提供刚好满足菌 细胞 生长所需 的甲醇量 ,在此种条件  下 ,外 源基因 的转 录水平 是 过量 甲醇诱导 时 的 3   ~5
倍 。③发酵系统 可监 测并及时补充毕赤 酵母 生长所需  的氧气 ,以保证外源 基因的正常表达 。  

53 降低外 源蛋 白的酶解  .
降低外源 目的蛋 白酶解的方法如下 :① 降低培养 

基的 p H值 和 培 养 温度 (2 ~3 ̄) 2℃ 0C ,破 坏 蛋 白酶 
作用 的最适条件 ,可减少外源 目的蛋 白的酶解 ;②培 

养基 中添加蛋 白胨 和酵母 提取物 以增加蛋 白酶作用 的 
底物 ,可减少对 目的蛋 白的酶解 ;③ 在 p H为 60的  .

培养基中 ,添加蛋 白胨 可 以抑制 蛋 白酶的酶 解作 用 ;  
④选用蛋 白酶缺 陷型菌株 。   此外 ,尝 试 不 同 的转 化 方 法 ,选择 适 宜 的 信号 

肽 ,构建泛肽过量表达 的菌株【和通过筛选大量转化  9 】
菌株也可获得高表达 菌株 。   6 结 语  参考文献 :  
1 Cr h oJ ,   e gi  L  e n 馨 删 .Hto gu re  xrs ni t  Il - e ro s o i ep si     eI }   e lo p tn e o n h ll ey

巴斯德 毕赤酵母表达 系统具有极好 的生产应用前 

景 ,其主要优势如下 :① 毕赤酵母 更接近高等真核细  胞 ,不含 内毒索和其他有 害物质 ,使用安全 :同时表  达的外源性 目的蛋 白可正 确折 叠 和进行 糖基 化作 用 ,  
因此具有天然蛋 白所应 有的生物学活性 。②培养要求 

l K  e t iI aos F M   idioyRv 00 4( ) 0  p c a  ci psr . E SMc b l   e,2O ,2 1 : y sP I a ti r og  
4 5—6 . 6 

2 C e g删 , C r hn   rg e g io儿 , s i , e.1 R c m ia t r en e pe s n i  e h J ta . e o bn n  o i  x r /  n   p t so

p I  lOS a ec . o cl ieho g,20 ,1 () 3— jI pSI I   d w Ml u r ocnl y 00 6 1:2   ci l['   r a [ e a8 t o
5   2.

条件低 ,繁殖速度快 ,能进行 高密度培养 ,且能耐受  较高的液体静压 ,因此 能低成本大规模生产 。③ 目的  基因整合在 染色体上具有 高稳定性 ;同时可高表达 分  泌型 功能性外 源 目的蛋 白 ,因此能有效克服复性 造成  的蛋 白损失 。④毕赤酵母极少 分泌 自身蛋 白,在其培  养液 中除 目的蛋 白外 ,几乎不含任何 其他蛋 白,易于 
纯化 。  

3 B el   . Sc e o    eo bn n  u a  n u n— l e 乎    d r y RA e rt n e rc m ia t m n isl e i f h i i k

f rI s     ̄o

( F—1 . e os o Bo 98 0 :19 7 . I G ) M t d M l i,19 ,1 h     l 3 4 一l7  
4 Ci o     hmvl V,C e g J u rg  M, M a h rM e g e  M.R c mbn n  r enp o l O  n eo i t o i  rd a pt  ̄ Ri   a  lo o o iae—d f t es a f P e i at - i e n a h l xd s c   eei   ri c v t ne i ap s i nf h  ̄s d—b t f n — a dIm o   n

ti s EzI Mi ̄ Tcnl 97 1( ) 7 — 8 . ao . I r t n l l e o eho,19 ,2 4 :27 23 ye r  
5 R ma o    o ns MA.A v ne     e uee Pe i a d a c si t  s f i ap 鼬耐 sf I  一 l e n h h o I r i e l v   p es n u r t pno     i eh o g , 19 , 6: 5 7—5 3  r ̄i .C r n   ii i B o e n l y 9 5 o e O n n t o 2 3 . -  

6 R ao     ̄ n sMA, S o rC e r   A, Cae J .F mi e l   r J o  ̄ 

ep es n i  x r i  n so

:a  

巴斯德毕赤表达系统作为生产外源蛋白的重要宿 
主菌 已经得 到广泛的应用 ,表达 的蛋 白质包括 酶 、膜  蛋 白、抗 原 、抗体和调节 蛋 白等 ( 最新表达 的蛋 白见 
? - ? — —

r i . e t 92 e e Y a ,1 ,8() 43 48 vw s 9 6 : 2 —8.   7 Ke sf ,Ptro A ,l c M. e 1   jde T ee ̄ n F - h sa咖 d  I I t h   ad I c 墨- n I I   c如| l

ln fnuni P h   sr . ieho A p Bo e i   i l   l i p ti B t ni pl i hm,19 , 9 ( t o o s i n c a a os o c     c 99 2 p 
1 :7 —8 . ) 9 6  

4 6 ?— —  — —

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Vo . No 1 i3, .  

M a .2 0   r ,0 4

8 M n i   , Gra R Q i ̄ O ta.V   otn R eo ai , u t c  n 。e 1   0 n N— lkd   li I   i e  n
0i 艘I l 群 c   d   t c r   f h t o o s p 0 i   e rt   y te m ty  e s u t e o   ee g u   rt n sce d b   h   eh - r u s l ml e8 e

Bo ii   i i S i ,2O。3 () 5 —1 . ih c e B  ̄ c ic O3 5 2 :1 cm a t o a na 4 6  o 1  H 8 ∞  e ,Srt   印l qD t1 A州 e   0 i h at  r J oeY, l mo  ,ea.   Ⅲ lnt c? I e i
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文章编号:1 1 49 20 )0 一 07 0  6 — 65 I 4 l 04 — 4 7 0

抗 菌 肽 及 其 转 基 因动 物 的研 究进 展 
郭向华 综 述 安云庆 审校 

( 首都 医科 大学微 生物和免疫 学 系.北京  105 ) 004 
【 要】 抗菌肽是具有广谱抗菌活性的小分子阳离子多肽, 摘   不易产生抗性菌, 是新一代抗生素的理想候选者。  
利用转基因动物不仅能够进行抗菌肽活性研究 ,而且能够用来生产抗菌肽 ,在医学上具有独特的研究和应用价值。本  文简述了抗菌肽的作用机理和特点 、抗菌肽的转基因动物研究进展,并探讨了进一步研究和应用抗菌肽 中存在 的问题 
及对策。  

【 关键词】 抗菌肽;   转基因动物 
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