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杏鲍菇菌种液体培养研究初报



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杏鲍菇菌种液体培养研究初报
马立芝 1 马浩 2 吴薇 2 高振江 2
065000; 1 廊坊师范学院生物系 河北廊坊
zjgao@cau.edu.cn

2 中国农业大学 北京 100088 摘要: 本文以菌球的干重、密度、直径为检验指标,对杏鲍菇菌种液体培养的适宜培养基、 培养条件及培养期进行了探讨。结果表明,对杏鲍姑菌种进行液体培养宜选用黄豆粉 6%,葡 萄糖 3%, 蛋白胨 0.2%, KH2PO40.05%, MgSO40.05%, VB110mg/L 作为培养基,采用装液量 100ml、转速 210 r/min,培养温度 25℃,接种量 10%的培养条件,最佳培养期为 4 天。 关键词: 杏鲍菇 液体菌种 培养

杏鲍菇,又名刺芹侧耳,伞菌目侧耳科侧耳属

[1]

。菌肉肥厚,质地脆嫩,有杏仁香味,
[2]

口感极佳,是味道很好的一种平菇,有“平菇王”之称
[3]

。药用价值可提高免疫功能,具

有抗癌、降血脂、润肠胃、美容的效,其氨基酸、矿质元素、寡糖含量都相当高,具有很高 的营养价值 。因此,受到国内外消费者的青睐,是很有推广价值的一种珍稀食用菌。然而, 由于食用菌传统的固体生产模式存在周期长、产量低等局限性,因此利用液体菌种生产势在 必行。液体菌种生产工艺简单,材料易得,生产周期短,菌龄整齐,生产成本可大幅度下降
[4]

。鉴于此,本文对杏鲍菇液体菌种培养条件进行研究,为杏鲍菇液体菌种的生产提供良好

的科学依据。

1.材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 菌种 杏鲍菇母种由廊坊市绿丰食用菌公司提供。 1.1.2 仪器设备 电热鼓风干燥箱(500×500×500), 霉菌培养箱(MJ-160B 型), 立式电 热压力蒸汽灭菌器(LDZX-40Ⅱ), 双数显汽浴恒温振荡器(TH2-82A),80 目筛 网。 1.1.3 培养基及其制备 ○ 斜面培养基(PDA 培养基): 马铃薯 20% ,蔗糖 2% ,琼脂 2% 。○ 一 1 2 级摇瓶培养基: 葡萄糖 3%, 蛋白胨 0.2%, KH2PO40.05% , MgSO40.05% , VB110mg/L, 酵母浸粉 0.5%,琼脂 0.4%。○ 二级摇瓶培养基: 黄豆粉 6% (玉米粉 6%,麸皮 3 6%, 马铃薯 20%) ,葡萄糖 3%, 蛋白胨 0.2%, KH2PO40.05%, MgSO40.05%, VB110mg/L, pH 自然。

-1-

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1.2 实验方法
1.2.1 菌种制备 1 ○ 一级菌种的制备 ○ 二级菌种的制备 2 温振荡培养。5 天。 1.2.2 测定内容及方法 1.2.2.1 菌球密度 1.2.2.2 菌球直径
[6]

取 0.5cm2 左右的母种菌块接种于装有 150ml 一级培养基的 500ml

三角瓶中,每瓶 3 块,25℃下静置 2 天,然后在温度 25℃、转速 180r/min,振荡培养 5 天。 将一级菌种按试验要求接种于装有二级培养基的 500ml 三角瓶中,恒

取 1ml 培养液于培养皿中,直观计数,取 3 次求平均值。 按 1ml 培养液含菌球大小的数量比,取 15 个菌球在培养皿

[6]

中排成一列,测总长度,然后计算单个菌球直径,取 3 次求平均值。 1.2.2.3 菌球干重
[7]

80 目筛网过滤菌球,清水洗涤数次,然后放入干燥箱 105℃

烘干 2 小时,冷却后称重,然后再放入干燥箱中 105℃烘干半小时再称重,直到两 次称重的重量差不超过 2mg 即为恒重。

2.结果与分析
2.1 培养基选择试验
本研究对杏鲍菇液体菌种在 4 种培养基中的生长情况进行观测,结果见表 1。 表1 4 种培养基中杏鲍菇液体菌种的生长情况 Tab 1. Growth status of Liquid fungus seeds of Pleurotus eryngi in four kinds of culture medium 各项指标的试验结果 培养期 黄豆粉 玉米粉 麸皮 马铃薯 干重(g/100ml) 3.27 2.38 2.05 1.25 a A b d B D c C 密度(个/ml) 111 74 56 23 a b A AB b AB bc B 直径(mm) 0.88 a A B 1.13 b B 1.31 b 2.28 c BC

注:a、b、c、d 为差异显著性分析,A、B、C 为差异极显著性分析 在黄豆粉培养基中杏鲍菇液体菌种菌球的直径最小,干重最大,密度最大, 经过方差分析与其他 3 种培养基中的菌球存在显著差异。菌球直径越小、密度和 干重越大则液体菌种流动性越强、越易分散、发菌点越多、萌发越快。由此可见, 黄豆粉培养基中的杏鲍菇菌种最好,玉米粉和麸皮培养基中的菌球居中,马铃薯 培养基中的菌球最差。综上所述,黄豆粉培养基可作为杏鲍菇液体菌种的最佳培 养基。

2.2 培养条件试验
-2-

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2.2.1

摇瓶装量对菌丝生长的影响

摇瓶装量对菌丝生长影响的结果见图 1, 从图 1 中可以看出, 随着装液量增加, 生物量明显减少,这是因为培养液装量过大,液体内溶氧量相对减少,液体培养 代谢的有机酸等物质有所积聚,影响了菌丝体的正常呼吸代谢,因此增加溶液中 氧的含量,对其生长十分重要,但从经济的角度看,选择 100ml 的装液量较为适 宜。
菌丝球干重(g/100ml) 3.5 3 2.5 2 1.5 1 75 100 125 150 摇瓶装量(ml) 175

图 1
菌丝干重(g/100ml)
3.5 3 2.5 2 1.5 1

摇瓶装量对菌丝生长的影响

100

150

180

210

240

摇瓶转速(r/min)

图 2

摇瓶转速对菌丝生长的影响

2.2.2 摇瓶转速对菌丝生长的影响 摇瓶转速对菌丝生长影响的结果见图 2,由图 2 可以看出,在一定范围(﹤ 210r/min)内,随着转速提高,增加了培养液中的溶氧量,同时也增大了对菌丝 的剪切力,因而促进菌丝的生长及菌丝球数量的增加;转速达到 210r/min 时,菌 丝干重最大(3.18g/100ml),但转速过大时,对菌丝的机械刺激也加大,反而影 响菌丝的生长。 2.2.3 培养温度对菌丝生长的影响 培养温度对菌丝生长影响的结果见图 3,由图 3 可以看出,培养温度在 25℃ 时菌丝干重达到最大(3.27 g/100ml),并在 25℃~30℃之间变化不大,温度高
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于或低于这一区间菌丝干重都有所下降。 2.2.4 接种量对菌丝生长的影响 接种量对菌丝生长影响的结果见图 4,由图 4 可以看出,接种量 15%是菌丝干 重最大(3.42 g/100ml),但接种量 10%与 15%之间差异不大。
菌丝干重(g/100ml) 3.5 3 2.5 2 1.5 1 15 20 25 培养温度 30 35

图 3
菌丝干重(g/100ml)
4 3.5 3 2.5 2 1.5 1

培养温度对菌丝生长的影响

5%

10%

15%

20%

接种量(%)

图 4

接种量对菌丝生长的影响

2.3

培养期试验
不同培养期对菌球各项指标的影响见表 2,由表 2 可看出:菌球密度在前 4

天迅速上升,到培养 4 天后菌球数达到峰值然后下降。菌球直径随菌球密度变化 而变化,菌球密度大,其直径小,反之则大,总体是前 4 天减小后 4 天增加。干 重量持续增加,在第 5 天后趋于稳定,并到第 8 天有下降趋势。方差分析显示, 培养 4 天的菌球各项指标中菌丝干重与培养 5、6、7、8 天之间差异不显著,菌球 密度、菌球直径与其它培养期间存在显著性或极显著性差异。

-4-

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表2 Tab.2 培养期 2d 3d 4d 5d 6d 7d 8d

培养期对各指标的影响 各项指标的试验结果

Influence of culture period on the measuring index 干重(g/100ml) 0.505 1.144 2.796 2.809 2.928 2.950 2.937 c C b B a A a A a A a A a A 密度(个/ml) 20 76 148 80 a A b B c C b B 直径(mm) 1.59 a 1.21 c 0.67 d 1.27 c 1.32 b 1.55 a A B C B AB A

60 ab B 58 ab B 44 a A

1.54 ab A

注:a、b、c、d 为差异显著性分析,A、B、C 为差异极显著性分析 综合考虑液体菌种在生产实践中应具有发菌点多、易流动等特点,所以尽管 培养 4 天的液体菌种的菌丝干重量不是最大的,但菌球密度最大、菌球直径最小, 因此我们认为杏鲍菇液体菌种的最佳培养期为 4 天。 对培养过程中各指标的变化情况分析如下:在培养前 2 天内有少量新生菌球 形成,为原转接的菌球脱落体;培养 3 天,新生菌球增多,菌球边缘有大量绒毛 状菌丝形成;第 4 天新生小菌球大量增加,是由于振荡使大量绒毛状菌丝脱落形 成,所以数目急剧增多,干重量也明显增加,菌球直径达到最小;第 5 天菌球数 目减少,可能是由于一些小菌球聚合成大的菌丝体,所以直径变大,干重量也增 加;6 天之后由于菌球开始老化自溶所以干重量趋于稳定并到第 8 天有下降趋势。

3.结论与讨论
本文采取 L9(3 )正交设计试验,综合平衡法对杏鲍菇液体菌种培养条件进行研究,以 菌球干重、密度、直径为检验指标,得出了温度 30℃,转速 210r/min,接种量 15%,装量 100ml 为最佳组合。经过试验表明,接种量对菌球干重影响非常大,处理 3 中接种量为 15% 干重最大,处理 5 中接种量为 5%干重最小。转速对菌球密度影响最大,且为 210r/min 时菌 球密度最大。温度对各个因素的极差都不是最大的,因此不是最主要的因素。装量的多少可 能关系到液体内溶氧量的多少,但装量的变化规律对各指标的影响有待进一步研究。
4

参考文献
[1]黄年来等. 中国大型真菌原色图鉴. 北京:中国农业出版社,1998:25 [2]陈为平. 珍稀菌蕈杏鲍菇特性及覆土栽培新技术. 中国食用菌,2002,21(1):18 -5-

http://www.paper.edu.cn [3] 黄年来. 一种前景看好的珍稀食用菌 -----杏鲍菇. 中国食用菌, 1998,17(6):3-4 [4]汪维云,朱金华.食用菌液体深层发酵技术研究及展望.中国食用菌,1998.17(2):11~12 [5]黄秀梨.微生物学实验指导.北京:高等教育出版社,1999:114 [6]刘炳明.杏鲍菇液体培养条件的研究.中国食用菌, 2004,23(1):58~59 [7]王叔淳. 食品卫生检验技术手册. 北京:化学工业出版社, 2002:116~118

A Preliminary Study on the Liquid Culture for Fungus Seeds of Pleurotus eryngii
Ma Lizhi1 Ma Hao2 Wu Wei2 Gao Zhenjiang2 1. Langfang Normal College 2. China Agricultural University Abstract
In this paper, The orthogonal testing method of L9(34) was taken to study the effect of different combination of liquid capacity, temperature, rev and inoculate quantity according to observing and measuring index of dry weight, density and diameter of Pleurotus eryngii pellet.. The result showed that the optimum combination of submerged culture of Pleurotus eryngii is liquid capacity 100ml,temperature 30℃ ,rev 210r/min, inoculate quantity 15﹪. These kind of liquid seeds of Pleurotus eryngii are suitable for planting.

Keywords Pleurotus eryngii Liquid fungus seeds

Culture

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